分子生物工具书之：核酸提纯-DNA

▋ DNA 产物基础知识

人们如今对 DNA 的量化，一般而言是通过多重 PCR、real-time PCR 和对稀少事件的研究来进行的，因此高质量产物 DNA 更为重要。高质量的量化产物是获得高质量的沿河检查结果的先决条件。我们不能了解 DNA 产物控制系统的文书工作定律，然后针对全面性应用可选择最适合于的化学流程。

DNA 产物少见的挑战

● 氢化探头从而释放出来 DNA● 将 DNA 分子与肝细胞才会、核糖体、糖类和 RNA 等其他分子剥离● 保持 DNA 分子的延续性

DNA 举例来说有所不同遭遇的挑战也有所不同。例如糖果等食品，其中都所含色氨酸的有机化合物，如果这些有机化合物被已产物的 DNA 空投，则可能依赖性沿河的检查。从革兰氏阳性微生物中都剥离 DNA 需要高效的氢化微生物厚厚的肽聚糖角质层。一定要确保你运用于的 DNA 产物方法有很难解决比对遭遇的问题。

怀旧若有：体内和秘密组织比对在运用于前需冷冻保存，以尽量减少方式中都对 DNA 的摧残。在取显现出一小部分进行 DNA 产物之前需将解冻后的体内完全混和。

DNA 产物前提步骤

DNA 产物：氢化、相结合和洗净

氢化：摧残细胞才会或秘密组织-酶管控-飞轮摧残-去垢剂管控

氢化：使核糖体变性人或失去活性-离子去垢剂、混和物、还原剂、甘油和苯甲酸类-酶活性（如酶活性 K）

氢化：使催化作用方式中都-螯合剂（例如 EDTA）-酶活性（例如 酶活性 K）

相结合与洗净：剥离 DNA-转换成其他核酸（如 RNA）-转换成核糖体 •有机萃取 •卤析 •与固常与小分子相结合 -硫化物游离 -烷基对等木柱 -磁性微粒

相结合与洗净：从其他细胞才会物质中都剥离 DNA 的方法有

■ 有机萃取

当硝基或硝基: 混和物与细胞才会氢化物混和时，才会形成两常与：水常与和有机常与。溶剂 DNA 分子转入溶剂常与或「水常与」，而变性人的核糖体和其他细胞才会破洞则转入有机常与。

■ 卤析

卤可以让核糖体沉淀物，从而降高其亲水性，然后变性人，变性人后的核糖体失掉溶解性从而沉淀；通过离心法转换成沉淀的核糖体和细胞才会破洞。都用的卤还包括还包括硫酸、甲酸磷或甲酸铵。

■ 与固常与小分子相结合

绝大多数的 DNA 产物方法有主要依据的定律是：通过可依赖性地与固常与小分子相结合, 从而从粗氢化物中都产物 DNA。这类固常与小分子还包括硫化物小分子和烷基对等树脂。一般而言来说，运用于固常与小分子产物 DNA 比其他方法有只用格外短、操控格外便捷，因为不需要任何溶剂，而且可以微型化和自动化从而实现PCR。

与 DNA 相结合的固常与小分子一般来说

硫化物游离：DNA 才会在高含量离液卤（例如卤酸苯甲酸）实际上的情况下与硫化物相结合，但是核糖体不才会。可以运用于所含乙醇的洗净液去掉卤，然后在高离子数值的硫酸（例如 TE 或水）中都除掉 DNA。

烷基对等木柱：产物的主要定律是 DNA 中都远方负电荷的甲基基团与对等木柱上远方自由电子的分子之间常与互作用。在高卤条件下，DNA 与小分子相结合，而核糖体和 RNA（取决于所用的糖类）则被洗净去掉。DNA 可以用高卤糖类除掉。

在微粒微小进行的 DNA 磁性剥离：许多物化试剂盒的文书工作定律是运用于磁性微粒从硫酸中都捕获 DNA。磁性微粒可以由硫化物等涂层制品，DNA 的相结合和除掉取决于卤含量或 pH。

DNA 、含量和延续性

纯的、值得注意的 DNA 对于许多沿河测出至关重要。都用检验 DNA 的都用方法有是在 260nm 的波长处（DNA 在该波长下有最大独脚收西坡）测出比对独脚伴星。通过测出 280nm 波长处的独脚伴星，并且计数 260nm 与 280nm 处的独脚伴星之比，可以检查显现出产物流程中都可能运用于到的或完好无损在比对中都的其他有机有机化合物。荧光涂料和 qPCR 是计数 DNA 含量并确定制品延续性的替代方法有，主要在本指南全面性关于核酸定量章节进行详实讨论。

照片举例来说：普洛麦格